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SDS-PAGE凝胶电泳的操作步骤
SDS-PAGE凝胶电泳是一种广泛用于蛋白质分离和分析的技术，以下是天正信达技术小编对其详细操作步骤：
1. ?样品制备?
裂解?：使用裂解缓冲液将细胞或组织裂解，释放蛋白质?。
变性?：加入SDS和还原剂(如β-巯基乙醇或DTT)，使蛋白质变性并带上负电荷?。
煮沸?：将样品在95°C加热5-10分钟，确保蛋白质变性?。
2. ?凝胶制备?
分离胶?：根据蛋白质分子量范围，配制适当浓度的分离胶(如10-15%)。将分离胶溶液灌入玻璃板之间，用水或异丙醇覆盖顶部，待其凝固?。
浓缩胶?：配制浓缩胶(如4%)，灌入分离胶上方，插入梳子，待其凝固后形成样品孔?。
3. ?电泳槽准备?
组装?：将制备好的凝胶放入电泳槽，确保玻璃板正确对齐?。
加缓冲液?：加入电极缓冲液，确保内外槽液面齐平?。
4. ?加样?
样品上样?：将变性后的样品与上样缓冲液混合，用微量移液器小心加入凝胶孔中?。
Marker?：在同一凝胶中加入蛋白Marker，作为分子量标准?。
5. ?电泳?
连接电源?：将电泳槽与电源连接，初始电压设置为80V，待样品进入分离胶后调整为150V?。
电泳?：在电场作用下，蛋白质根据分子量大小在凝胶中分离?。
6. ?染色与脱色?
固定?：电泳结束后，将凝胶从玻璃板上剥离，放入固定液中?。
染色?：使用考马斯亮蓝等染料对蛋白质进行染色?。
脱色?：去除背景染色，使蛋白质条带清晰可见?。
7. ?成像与分析?
成像?：使用凝胶成像系统对染色后的凝胶进行成像?。
分析?：根据蛋白质条带的位置和强度，分析目标蛋白的分子量和表达水平?。
以上步骤涵盖了SDS-PAGE凝胶电泳的主要操作流程，确保实验的准确性和可重复性?。
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