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ELISA实验中，血液样本的收集与处理重要性，您了解吗?
在ELISA实验中，血液样本的收集需使用无热原、无内毒素的试管或离心管。血清样本需让血液自然凝固后离心分离，一般室温放置2小时或4℃过夜，再以1000×g离心20分钟收集上清液。血浆样本则需加入抗凝剂，常用EDTA、肝素钠或枸橼酸钠，采集后30分钟内以1000×g离心15分钟获取。处理过程中要避免溶血和细菌污染，它们会干扰检测结果。保存时，应将血清或血浆分装，并储存在-20℃或-80℃，避免反复冻融。正确的收集和处理方法能确保血液样本的质量，为ELISA实验提供可靠的基础数据。
ELISA血液样本收集与处理操作要点
一、样本类型选择
血清
采集后室温静置10分钟~2小时(或4℃过夜)使血液凝固，随后2000-3000×g离心20分钟取上清。
避免溶血(红细胞破裂会释放干扰物质)及细菌污染。
血浆
需使用抗凝剂(如EDTA、肝素钠或柠檬酸钠)，采集后30分钟内混匀，离心条件同血清。
高血脂或溶血样本需预处理(如二次离心)。
全血
直接采集后需立即加入抗凝剂，短期可存于4℃(≤2天)，长期需分装冻存。
二、关键操作步骤
离心规范
血清/血浆离心转速通常为2000-3000×g，时间15-20分钟，低温(2-8℃)操作更佳。
若上清有沉淀，需重复离心。
分装与保存
短期使用可存于-20℃，长期建议-80℃，避免反复冻融(≤3次)。
分装体积按单次实验用量设定。
特殊处理
溶血样本：需高速离心(如10000×g)或过滤去除血红蛋白。
组织/细胞样本：需裂解后离心取上清，避免细胞碎片干扰。
三、注意事项
抗凝剂选择：EDTA可能干扰某些指标(如钙离子检测)，需参照试剂盒说明。
无菌操作：全程使用无热原、无内毒素耗材，避免外源性污染。
质控要求：每批次实验需包含阴/阳性对照，确保结果可靠性。
通过规范操作可显著提升ELISA检测的准确性和重复性。
正确采集血液样本的方法
一、采血前准备
患者状态
需在平静、休息状态下采样，避免情绪激动或剧烈运动影响检测结果(如血糖、血钾可能临时升高)。
空腹要求：部分项目(如血糖、血脂)需空腹8-12小时，但非所有检测均需禁食。
消毒与器械
穿刺部位用复合碘或75%酒精消毒，范围≥5cm×5cm，由内向外旋转擦拭2遍。
使用一次性无菌采血针和真空采血管，避免交叉污染。
二、采血操作步骤
静脉采血(常用)
部位选择：成人选择肘前静脉(如贵要静脉、头静脉)，婴幼儿可选颈外静脉或股静脉。
止血带使用：扎于穿刺点上方6-10cm，时间≤1分钟，避免血液浓缩。
穿刺技巧：针头斜面朝上，与皮肤呈20°-30°角进针，见回血后降低角度至5°继续进针。
采血后处理：先松止血带，再拔针，用棉签按压穿刺点1-2分钟防血肿。
毛细血管采血(指尖/耳垂)
部位：成人取无名指指腹内侧，婴幼儿可选足跟或大脚趾。
操作：消毒后刺入2-3mm，弃去第一滴血(含组织液)，自然流出血液收集。
特殊注意事项
避免从输液侧肢体采血，防止药物干扰。
血培养需严格无菌操作，成人每瓶采血量5-10ml。
三、样本处理与保存
抗凝剂选择
EDTA管(血常规)、肝素管(生化检测)、柠檬酸钠管(凝血功能)需按检测要求选用。
避免样本异常
溶血：禁止挤压穿刺部位，采血后需沿试管壁缓慢注入血液。
脂血：空腹采血可减少干扰，严重脂血需离心后检测。
保存条件
生化检测样本：2-8℃保存≤4小时，长期需-20℃或-70℃冻存。
四、常见错误与规避
错误操作：止血带超时、从输液针头采血、挤压局部取血均会导致结果失真。
记录要求：需标注采血时间、患者信息及特殊状况(如输液时采血)。
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