如何做到快速高效?这份优选指南帮你迅速做出决定!
DNA提取是进行测序、PCR等实验的关键步骤。选择合适的提取方法至关重要。物理法,如研磨法、超声波法、冻融法,通过物理手段破坏细胞结构释放DNA,操作简单但可能引入污染。化学法,如酚/氯仿提取法、盐提取法、异硫氰酸胍法,利用化学试剂去除杂质,提取效率高但操作繁琐。此外,商业化DNA提取试剂盒,如磁珠法、硅胶柱法,简化了提取过程,适用于大规模样本处理。新技术如微流控芯片技术、纳米材料技术、自动化提取设备,在提高提取效率和纯度方面展现出巨大潜力。选择时,需考虑样本类型、实验需求、成本预算等因素。避免核酸酶污染,确保样品新鲜,严格按照协议操作,以提高提取效率和质量。
以下是DNA提取方法优选指南,综合不同样本类型、提取效率及下游应用需求,助您快速决策:
一、核心提取方法对比
方法 适用样本 得率(μg/mL) 纯度(OD260/280) 耗时 下游应用
硅胶膜吸附法 血液、细胞、组织 15-42 1.7-1.9 30分钟 PCR、测序
磁珠法 微量样本(如FFPE、唾液) 10-30 1.8-2.0 20分钟 高通量测序、qPCR
CTAB法 植物、真菌 5-20 1.6-1.8 2小时 酶切、克隆
SDS法 动物组织、细菌 10-25 1.5-1.7 3小时 基因组分析
二、按样本类型推荐
血液/细胞样本
选择:硅胶膜吸附法(如Qiagen试剂盒),得率稳定且操作标准化
替代:磁珠法(适合自动化处理,但成本较高)
植物样本
CTAB法:含多糖/多酚的植物组织需结合PVP去除杂质
快速方案:商用植物DNA提取试剂盒(如Yeasen品牌)
复杂样本(如土壤、粪便)
复合裂解:物理研磨+SDS/蛋白酶K联合处理
三、纯度与完整性控制
纯度优化
低OD260/280(<1.6):增加蛋白酶K消化时间或乙醇洗涤
高OD260/280(>1.9):加入DNase-free RNase去除RNA
完整性检测
电泳:清晰23kb条带(基因组DNA)
qPCR:检测短片段扩增效率(适用于FFPE样本)
四、品牌与试剂盒选择
高性价比:Starvio血液DNA试剂盒(得率11-42μg/mL)
高灵敏度:Qiagen磁珠法试剂盒(1ng起始量)
特殊需求:Yeasen植物DNA快速提取盒(含多糖清除剂)
五、常见问题解决
低得率:增加样本量或更换裂解液(如升级为含SDS的裂解体系)
多糖污染:CTAB法结合氯仿/异戊醇抽提
自动化需求:选择96孔板磁珠提取系统
根据实验目标和资源灵活选择方法,如需具体操作细节可进一步说明样本类型及设备条件。
天津天正信达供应:RNA逆转录试剂盒、逆转录试剂盒、PCR试剂盒 、提取试剂盒、色谱进样瓶、培养基瓶、试剂瓶、胎牛血清、染色液、试剂瓶、QPCR试剂盒、生物试剂、抗体、琼脂糖、实验耗材,我司拥有一支覆盖生物化学、分子生物学、免疫学等专业人员的研发、构建了仪器设备齐全的实验技术平台,主要包括AKTA、高压均质机、全波长酶标仪、高速落地离心机和qPCR仪等大型仪器设备。