天正信达向您介绍ELISA试剂操作加样与洗板
一、ELISA加样操作要点
基础规范?:加样前将试剂、样本平衡至室温,使用校准后的低吸附枪头,每加完一个样本更换枪头,避免交叉污染。
操作细节?:垂直悬空加样,枪头不接触孔壁,对准孔底缓慢注入液体,避免产生气泡;若出现气泡,轻弹板底消除,防止干扰后续读数。
排布要求?:标准品从高浓度到低浓度依次加样,所有标准品、样本设置双孔,同时预留空白孔、阳性/阴性对照孔,保障数据可靠性。
二、ELISA洗板操作要点
前期准备?:提前按说明书稀释浓缩洗涤液,若冷藏后析出结晶,37℃水浴溶解后再配制,使用新鲜去离子水,现配现用。
手工洗板?:弃去孔内反应液后,每孔加满300-350μL洗涤液,静置浸泡30-60秒后甩干,在无尘吸水纸上拍净残留液体,按要求重复3-5次,全程避免孔内长时间干涸。
自动洗板?:提前冲洗管路,设置每孔注液250-300μL、浸泡30秒,调整针头高度避免刮伤孔底,程序结束后轻拍酶标板去除残留液。
三、注意事项
加样后及时贴紧封板膜,减少液体蒸发引发的边缘效应,保证孵育温度稳定。
洗板次数严格遵循说明书,次数不足会导致背景偏高,次数过多易洗脱有效结合物,降低检测信号。
最后一次洗板后需拍干,避免残留洗涤液稀释后续试剂,造成显色偏浅、结果偏差。
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